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Die helicase-dependent amplification (HDA, engl. für ‚Helikase-abhängige Amplifikation‘) ist eine Methode zur Amplifikation (Vervielfältigung) von DNA. Sie ist eine Variante der isothermalen DNA-Amplifikation.cite-ref-pmid-15247927-1-0[1]

• Eigenschaften

• Einzelnachweise

Die recombinase polymerase amplification verwendet eine Helikase (TteUvrD, Helikase-Superfamilie II, aus Thermoanaerobacter tengcongensis, jetzt Unterart von Caldanaerobacter subterraneuscite-ref-fardeau2004-2-0[2]),cite-ref-3[3] ein Einzelstrang-bindendes Protein und eine strangversetzende DNA-Polymerase.cite-ref-4[4] Durch die Verwendung einer strangversetzenden DNA-Polymerase kann die Reaktion bei einer konstanten Temperatur von 37 bis 42 °C erfolgen, bei Raumtemperatur verläuft die Reaktion etwas langsamer.cite-ref-5[5] Analog zur qPCR kann die HDA auch zur Quantifizierung von DNA verwendet werden.cite-ref-pmid-15247927-1-1[1] Analog zur Multiplex-PCR können mehrere Sequenzen parallel vervielfältigt werden.cite-ref-6[6]

Alternative Methoden zur Amplifikation von DNA sind z. B. die Polymerasekettenreaktion, die multidisplacement amplification, die isothermal assembly, die loop-mediated isothermal amplification (LAMP), nucleic acid sequence-based amplification (NASBA), die recombinase polymerase amplification (RPA), die nicking enzyme amplification reaction (NEAR), die rolling circle replication (RCA).cite-ref-7[7] Weitere Nachweisverfahren sind z. B. die nicking endonuclease signal amplification (NESA) und nicking endonuclease assisted nanoparticle activation (NENNA), exonuclease-aided target recycling, junction or Y-probes, split DNAZyme und deoxyribozyme amplification (die beiden letzten Methoden nutzen DNAzyme alies Desoxyribozyme), nicht-kovalente DNA-Katalysen und die hybridization chain reaction (HCR).cite-ref-8[8]

cite-note-pmid-15247927-11. ↑ M. Vincent, Y. Xu, H. Kong: helicase-dependent isothermal DNA amplification. In: EMBO reports. Band 5, Nummer 8, August 2004, ISSN 1469-221X, S. 795–800, doi:10.1038/sj.embor.7400200, PMID 15247927, PMC 1249482 (freier Volltext).

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cite-note-55. ↑ L. Lillis, D. Lehman, M. C. Singhal, J. Cantera, J. Singleton, P. Labarre, A. Toyama, O. Piepenburg, M. Parker, R. Wood, J. Overbaugh, D. S. Boyle: Non-instrumented incubation of a recombinase polymerase amplification assay for the rapid and sensitive detection of proviral HIV-1 DNA. In: PloS one. Band 9, Nr. 9, 2014, S. e108189, ISSN 1932-6203, doi:10.1371/journal.pone.0108189, PMID 25264766, PMC 4180440 (freier Volltext).

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cite-note-77. ↑ E. C. Oriero, J. Jacobs, J. P. Van Geertruyden, D. Nwakanma, U. D’Alessandro: Molecular-based isothermal tests for field diagnosis of malaria and their potential contribution to malaria elimination. In: The Journal of antimicrobial chemotherapy. [elektronische Veröffentlichung vor dem Druck] September 2014, ISSN 1460-2091, doi:10.1093/jac/dku343, PMID 25223973.

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